L’esame coprologico a fresco è un metodo rapido ed efficacie per la ricerca di protozoi intestinali (Trofozoiti), ma questo deve essere eseguito entro 30 min. causa incistamento dei parassiti.
- Entro trenta minuti sarà possibile osservare i trofozoiti protozoari.
- Nei campioni stoccati e conservati questi possono subire lisi o andare incontro a incistamento (cisti e oocisti) e non essere più visibili come tali.
Metodi
Striscio diretto
L’esame coprologico a fresco, deve ovviamente essere svolto in tempi rapidi e proprio per questo presso la propria struttura, Bisogna quindi essere in grado di saper riconoscere autonomamente le varie forme protozoarie. I campioni diarroici rendono questo esame ancora più indicato.
Tecnica di preparazione
- Bisogna apporre una goccia di soluzione fisiologica su un vetrino porta oggetti nella quale andremo a stemperare una minima quantità di feci (poco più di una lenticchia), una quantità elevata di feci potrebbe far perdere la trasparenza necessaria all’osservazione del campione.
- Sul materiale preparato andremo ad apporre un vetrino copri oggetti
- L’osservazione sarà tramite obbiettivi 10X e 40X (per migliorare l’osservazione di paradditi come Giardia e Cryptosporidium è consigliato il 40x)
- Per migliorare l’osservazione il microscopio deve essere impostato in modo da fornire il massimo contrasto possibile. (chiudere in maniera adeguata il diaframma del microscopio)
Tabella per lo studio morfologico dei parassiti
(le tabelle sono tratte da Malattie infettive del cane e del gatto. Malattie batteriche e protozoarie Copertina rigida – 31 ago 2008 di Graig E. Greene)
| Parassita | Procedura | Morfologia a fresco |
| Balantidium coli | ||
Trofozoiti | Striscio diretto | -Forma ovale -Movimento circolare sul proprio asse tramite cilia -Può essere visibile un micronucleo. |
| Cisti | Flottazione dopo centrifugazione in solfato di Zn | |
| Coccidia -Toxoplasma -Isospora -Sarcocystis -Hammondia -Besnoitia –Cryptosporidium | ||
| Oocisti | Flottazione dopo centrifugazione con soluzione di Sheater | |
| Entamoeba histolytica | ||
| Trofozoiti | Striscio diretto | -Cambia forma quando è attivo, -Si muove per mezzo di protrusioni del citoplasma. |
| Cisti | Striscio diretto | |
| Giardia | ||
| Trofozoiti | -Striscio diretto -Occasionalmen te osservati in flottazione | -Simmetrico bilateralmente con 2 nuclei divisi dall’asse mediano -Di forma periforme -Movimenti rollanti per mezzo di flagelli |
| Cisti | -Striscio diretto -Flottazione dopo centrifugazion in solfato di Zn o soluzione zuccherina | |
| Trichomonas | ||
| Trofozoiti | Striscio diretto | -Movimenti rapidi e sinuosi e a scatti per mezzo di flagelli |
Colorazione dello striscio diretto
Per facilitare la lettura dell’esame coprologico a fresco è possibile aggiungere una goccia di colorante, prima di apporvi il vetrino coprioggetti. In tal modo la visione delle strutture dei protozoi intestinali risulterà facilitata.
Tabella delle colorazioni per lo studio morfologico dei parassiti
| Colorante | Parassita | Effetto sul preparato e il parassita |
| Iodio (soluzione di Lugol) Colorazione conDiff Quick (Gimsea simile) | Giardia | -Colora il citoplasma delle cisti color oro -Il nucleo rimane rifrangente e chiaro -È possibile evidenziare anche i trofozoiti che appariranno con due nuclei e corpuscoli mediani Aspetto trofozoiti con colorazione |
| Blu di metilene (in generale utile per l’identificazione di trofozoiti) | Hentamoeba histolytica | Il nucleo ha una distribuzione periferica di cromatina e un compatto cariosoma centrale |
| Verde di metile | Balantidium coli | -Colora il macronucleo che ha forma di semiluna -Può essere presente un micronucleo |
| Eosina acquosa Cristal violetto | Questi colorati non colorano direttamente il parassita ma lo sfondo lasciando i parassiti trasparenti in risalto |
Cisti di Giardia non colorate. Senza la colorazione per un occhio inesperto è più facile confondere una ciste con i detriti fecali.
2 cisti Giardia al centro del campo. La colorazione mette in evidenza i nuclei e le strutture interne. Fonte