Categoria: Coloranti e colorazioni in citologia

La colorazione di Papanicolaou, usata in citologia è utile soprattutto per lo studio delle cellule epiteliali, infatti è per gli strisci cervico-vaginali che George Papanicolaou introdusse questa colorazione (Pap test). La colorazione di Papanicolau è una colorazione di tipo tricromica

Applicazioni

• Campioni ginecologici
• Espettorato
• Urina
• Agoaspirati, (FNAB, fine needleaspiration biopsy agobiopsia con ago sottile) da organi diversi
• Essudati
• Lavaggi.

Risultati

• Citoplasma:
  • Cianofilo (basofilo) Blu; verde intenso
  • Eosinofilo (acidofilo) Rosa
  • Cheratinizzato Rosa arancio
• Eritrociti: Rosso
• Nuclei: Blu nero; violetto scuro

Principio della colorazione di Papanicolaou

Come detto la colorazione di Papanicolaou è di tipo multicromica ed è basata sull’utilizzo di più coloranti

• Ematossilina
• Orange G
• Eosina
• Verde Luce

in 3 soluzioni.

• colorazione nucleare (ematossilina)
• OG-6 (Orange G)
• EA (Eosina e Verde Luce)

L’Ematossilina è il colorante nucleare

OG6 conferisce al citoplasma una colorazione dall’arancio brillante al giallo

L’eosina invece conferisce al citoplasma delle cellule pavimentose mature e superficiali una colorazione rosa; questa colorazione mette in risalto il carattere eosinofilo delle cellule cheratinizzate.

Il Verde Luce colora il citoplasma delle cellule basali e parabasali (cianofile), povere di cheratina e conferisce una colorazione verde-celeste.

La colorazione di Papanicolaou fornisce ottimi dettagli e contrasti cromatici della struttura nucleare. In oltre questa colorazione garantisce una sufficiente trasparenza del citoplasma e delle peculiari tonalità cromatiche tipiche degli stadi cellulari siano essi fisiologici e patologici(compresi gli inclusi)

Tutto ciò permette uno studio importante delle condizioni neoplastiche e flogistiche, anche associate a batteri e virus (HPV) .

PRO

Questa colorazione permette di apprezzare la fase di maturazione delle cellule, di identificare alterazioni dovute ad infezioni batteriche o virali e di valutare la predisposizione allo sviluppo del cancro.

CONTRO

La colorazione di Papanicolaou può avere procedure lunghe e complesse, ed è per ovviare a questo che sono state sviluppate formulazioni fast che hanno tempi e modi di lavoro più semplici; questo comporta una maggiore fruibilità della colorazione e un ausilio in diagnostica. Resta di fondamentale importanza la preparazione del citologo

Richiedi un campione

colorazione rapida con alcool (tempo min 2:30″ max 4 min.)

Metodo

1. Immergere rapidamente 10-15 volte in soluzione fisiologica per un secondo i vetrini, precedentemente fissati all’aria.
2. Passare rapidamente in immersione per 10-15 volte in alcool 96°
3. immergere il vetrino nella suluzione 1 per 30-60 sec.
4. sciacquare per 10 sec con acqua di fonte
5. immergere per 20-30″ in Blue water
6. sciacquare con 6 rapidi passaggi in acqua di fonte
7. 8-10 immersioni rapide in alcool a 96°
8. immergere il vetrino nella suluzione 2 per 30-60 sec.
9. immergere rapidamente 10-15 volte in alcool 96°

colorazione rapida senza alcool

Metodo

1. Vetrini fissati all’aria passaggio uno
2. Colorare i nuclei con ematossilina per 2-5 minuti.
3. Risciacquare rapidamente con acqua distillata.
4. Acqua di Scott (blu water), 3-5 minuti.
5. Risciacquare con acqua distillata.
6. Golding soluzione di colorazione per 2-5 minuti.
7. Risciacquare rapidamente con acqua distillata.
8. Disidratare rapidamente con etanolo.

A questo link potete trovare informazioni per chi vuole approfondire

Le colorazioni di May Grünwald-Wright-Giemsa sono tecniche di colorazione tipo Romanovsky, cioè metacromatiche differenziali. Queste possono essere usate separatamente o come May Grünwald -Giemsa e o Wright-Giemsa.

La base è sempre costituita dal blu di metilene e eosina e una soluzione alcolica, a queste si può aggiungere uno dei tre coloranti May Grünwald-Wright-Giemsa, oppure questi possono essere usati come coloranti unici. In questo caso prevedono i coloranti di base in un’unica soluzione alcolica . ES. la soluzione di Giemsa, è una miscela complessa, costituita da blu di metilene cloruro, blu di
metilene eosinato, azurro II eosinato. (soluzione alcolica completa)

USO

Le colorazioni di May Grünwald-Wright-Giemsa sono indicati soprattutto per lo studio parassitologico e citologico di campioni ematici e linfatici, fecali, (liquido duodenale e chilo) liquido cerebrospinale, delle sierose e del reticolo endoteliale

In generale una colorazione standard richiede circa 30 min, per questo si può presentare di difficile utilizzo nella pratica ambulatoriale, soprattutto per flussi di lavoro notevoli.

Caratteristiche prestazionali

I nuclei assumeranno svariate tonalità di viola. Il colore del citoplasma sarà di varie gradazioni, dal blu al rosa pallido. Nel citoplasma di alcuni tipi di cellule potrebbero comparire alcuni granuli dal rossiccio al lilla. I basofili saranno caratterizzati dalla presenza di granuli tra il blu scuro e il nero nel citoplasma. Gli eosinofili saranno caratterizzati dalla presenza di granuli di color arancione vivo nel citoplasma. I globuli rossi dovrebbero assumere un colore tra il rosa e l’arancione.

Questi coloranti in modo angolo al Diff Quick sono utili all’identificazione dei trofozoiti del Phylum Apicomplexa oltre parassiti fecali ed emoparassiti. Meno adeguati sono all’identificazione delle forme cistiche.

• Dientamoeba fragilis
• Pneumocystis
• Plasmodium falciparum
• Toxoplasma
• Flagellati
• Microsporidi
• Epatozoon
• Piroplasmi

Bisogna comunque precisare che per le oocisti di coccidi come Cyclospora, Isospora, Sarcocystis, Toxoplasma e per uno studio più approfondito del materiale fecale è preferibile utilizzare e/o affiancare altre colorazioni, che possono implementare lo studio di Apicomplexa anche nelle sue forme cisitiche.

Interpretazione

le cellule appariranno di colore azzurro o azzurro-grigi per il citoplasma e rosso-porpora viola per il nucleo.

La soluzione di May Grünwald, costituita da eosinato di blu di metilene che colora i nuclei in blu ed il citoplasma basofilo in rosso-rosa La soluzione di Giemsa, aumenta l’intensità della colorazione nucleare e la capacità di evidenziare selettivamente gli elementi cellulari e il reticolo endoplasmatico

Pro

Coloranti che permettono un buono studio citologico e dei parassiti associati a diversi campioni

Contro

Le colorazioni di May Grünwald-Wright-Giemsa sono piuttosto complesse da gestire sia a livello di sicurezza (tossicità), oltre che di metodo. I tempi id colorazione possono arrivare a oltre 35 minuti.

E’ preferibile usare il Diff Quick per sfruttare questo tipo di colorazione, più altre colorazioni non differenziali per integrare lo spettro analitico.

Richiedi un campione

Siamo in grado di fornire un kit di colorazione rapida tipo Giemsa, con la seguente procedura, richiedi un campione grtuito

Metodo Giemsa rapido

1. Dopo avere asciugato all’aria lo striscio di sangue, immergerlo nella soluzione di Giemsa non diluita per 5–6 minuti.
2. Immergere in acqua deionizzata per 2–4 minuti, in base alle proprie preferenze di colore.
3. Sciacquare in acqua deionizzata.
4. Asciugare all’aria ed esaminare al microscopio.

Oppure la colorazione standard

Metodo Giemsa standard

1. Fissare i vetrini in metanolo per 5–7 minuti.
2. Asciugare all’aria.
3. Diluire la colorazione di Giemsa con tampone a pH 7,2 rapporto 1:20. È possibile apportare modifiche alla tonalità del colore diluendo con il tampone.
4. Colorare la pellicola per 20–30 minuti.
5. Sciacquare in acqua deionizzata.
6. Asciugare all’aria ed esaminare al microscopio.

NB Nella valutazione dei risultati va ricordato che: il quadro cromatico è
fortemente influenzato dal pH delle acque di lavaggio e del tampone di diluizione; l’intensità della colorazione può variare in funzione dei tempi di differenziazione. TUTTE LE SOLUZIONI SONO FORNITE, subito pronti al lavoro.

La conoscenza dei coloranti e delle colorazioni diagnostiche e delle loro caratteristiche, può essere molto utile in laboratorio, per di più in una disciplina poco esatta come la citologia. In altre parole comprendere le loro caratteristiche e le modalità di utilizzo, sarà di aiuto nello studio e nella caratterizzazione dei campioni.

Al fine di perseguire questi obiettivi si tratterà particolarmente di alcune caratteristiche salienti

• pregi e difetti per il campione studiato
• facilità di utilizzo
• economia dei prodotti

E’ importante sottolineare che lo stesso principio di colorazione può avere metodiche applicative e risultati diversi. In altre parole ogni produttore, in fase di produzione può conferire caratteristiche uniche allo stesso tipo di colorante.